液相色譜儀分析時(shí)如何選擇合適的色譜柱

液相色譜柱有不同的長度、內(nèi)徑和類型等，我們在做色譜分析時(shí)應(yīng)如何進(jìn)行選擇呢？

1、色譜柱的長度和內(nèi)徑

對于色譜柱的長度和內(nèi)徑，可以基于我們需要分析物質(zhì)的復(fù)雜程度來選擇。兩支同樣填料的色譜柱，柱長越短，分離時(shí)間越快，分辨率會更好，同時(shí)壓力也將更大，可結(jié)合樣品的復(fù)雜性和希望分離的時(shí)間來選擇合適的柱長。對于色譜柱的內(nèi)徑，窄徑柱可提高柱的靈敏度，并可明顯降低溶劑的使用量。寬徑柱可以將系統(tǒng)死體積的影響降到最低，載樣量高，抗污染。

想用不同內(nèi)徑和長度的柱子來進(jìn)行色譜方法轉(zhuǎn)移，該怎么調(diào)整色譜條件呢？對不同內(nèi)徑和長度的色譜柱，我們可以使用以下方法來轉(zhuǎn)換進(jìn)樣量和流速：

2、苯基柱，氰基柱的適用情況

苯基柱可用于含苯環(huán)的芳香族化合物的測定，具有較高的選擇性。氰基柱/CN柱可作為一個(gè)保留能力最弱的反相柱使用，也可作為一個(gè)活性降低的正相柱使用。

3、要提高分離度時(shí)選擇色譜柱的方法

多個(gè)樣品不好分離的時(shí)候，該怎么通過選擇合適的柱子來提高分離度呢？提高分離度可從三個(gè)主要影響因素來考慮：柱效、選擇性和保留因子。可通過減小填料粒徑和增加柱長提高柱效。選擇性和固定相選擇以及pH條件有關(guān)，通過選擇合適的色譜柱和合適的pH，可以提高選擇性。保留因子主要與流動相組成和比例有關(guān)，其次流動相pH和離子強(qiáng)度影響目標(biāo)物存在狀態(tài)，也會影響保留因子。有時(shí)候適當(dāng)延長出峰時(shí)間增加保留因子，也可提高分離度。

4、測定多肽選用的色譜柱

分子量不高的多肽一般選用常規(guī)C18或C8柱就能測定，也有用離子交換柱、水性柱和HILIC親水作用柱。若流動相中含有三氯乙酸這類酸性添加劑，建議還是使用耐受低pH的色譜柱。

5、根據(jù)樣品特點(diǎn)進(jìn)行選擇

（1）樣品是極性的且弱酸性的，,可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測，即要選擇（2）如果樣品極性太強(qiáng)或酸性太強(qiáng)，可以選擇CN，NH2，硅膠柱，HILIC(親水色譜)，也有使用C18+強(qiáng)陰離子對試劑或強(qiáng)陰離子交換色譜柱。

（3）若樣品是堿性的，可選擇高純硅膠柱或一些經(jīng)過修飾的C18柱(如極性嵌入技術(shù)或堿去活技術(shù)等)，他們都會減少堿性化合物的拖尾，一般會選擇中性或偏堿的條件下做，因?yàn)檫@樣可增加堿性樣品的保留。

（4）如果堿性化合物的極性太強(qiáng)或堿性太強(qiáng)，可以選擇寬pH的C18色譜柱在高pH值檢測，或者選用HILIC色譜柱、強(qiáng)離子交換柱和C18+強(qiáng)陰離子對試劑或強(qiáng)陰離子交換色譜柱。