液相色譜儀正相和反相的詳細(xì)介紹

液相色譜儀使用說明中經(jīng)常會提到正相色譜和反相色譜，那么什么是正相色譜，什么是反相色譜，它們有什么區(qū)別呢？

其實(shí)正相色譜和反相色譜是由流動相和固定相極性大小來分類的，通常正相色譜固定相極性比流動相極性大，常用的流動相有正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯等。而反相色譜剛好相反，是流動相極性比固定相極性極性大，常用的流動相有甲醇、乙腈、四氫呋喃、水等。反相色譜是目前最通用的HPLC方法，大約95%的色譜工作者都在使用。

正相色譜體系中常用的是哪種色譜柱？正相體系常見的柱子有硅膠柱、氨基柱、CN基柱和Diol二醇基柱，最普通的是硅膠柱，正相硅膠柱一般保存在什么溶劑里面比較合適？短期和長期都建議保存在正相測定所用的流動相中，一般是正己烷和極少量的異丙醇 (95/5, 99/1, 99.5/0.5均可)。

正相柱在使用過程中與反相柱相比有什么需要注意的地方？正相柱和反相柱比，最需要注意的是水分，正相柱對水分非常敏感，流動相中水分含量的些微變化對保留時(shí)間影響很大，因此正相柱測定前平衡時(shí)間需要幾個小時(shí)甚至更長。

一根色譜柱怎么知道是使用于反相色譜還是正相色譜呢？可以根據(jù)填料來判斷，目前來說常用的反相填料有：C18、C8、C4 和苯基等，正相填料有：硅膠、氨基、氰基、二醇基等。

普通的C18柱能作為正相色譜柱使用嗎？一般不能，因?yàn)?/span>C18固定相屬于疏水性相對比較強(qiáng)的，疏水性強(qiáng)就是極性很弱，應(yīng)該找不出極性比它更弱的流動相了。況且色譜柱在使用時(shí)，要注意極性固定相盡量避免極性溶劑，非極性固定相盡量避免非極性溶劑，否則可能發(fā)生類似相似相溶的作用。對一般的反相柱，也就是洗干凈后置于純甲醇（乙腈）或者是80%左右的甲醇（乙腈）水中，然后用堵頭塞緊柱兩頭，以免保存溶劑揮發(fā)，下次使用前拿出來重新活化一下。

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